布病的檢測方法

布病的檢測方法
虎紅平板凝集試驗（RBPT）：
實驗原理：該試驗又稱為板式孟加拉紅平板凝集實驗。由于所用的抗原是酸性（PH3.6—3.9）帶色的抗原，該抗原與被檢血清作用時能抑制血清中的IgM類抗體的凝集活性，檢查出的抗體是IgG類，因此提高了該項反應(yīng)的特異性。器材與試劑：虎紅平板凝集抗原、載玻片、移液器、槍頭
方法：在載玻片上加抗原30μl，加入30μl被檢血清，混勻。在5min內(nèi)觀察結(jié)果，輕搖載玻片，出現(xiàn)凝集顆粒為陽性，否則為陰性。
試管凝集試驗（SAT）：
實驗原理：布魯氏菌侵入機體后，會刺激機體產(chǎn)生特異性抗體，這種抗體可與相應(yīng)的布氏菌抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在電介質(zhì)作用下，就會形成肉眼可見的凝集反應(yīng)，也就是用已知抗原查未知抗體。
器材與試劑：布病試管凝集抗原、生理鹽水、試管、移液管、移液器、小燒杯、槍頭、試管架
方法：1.準備試管：取9支試管放在試管架中編號。1號管為血清對照管，2—8號為試驗管，9號為抗原對照管。
2.血清稀釋：1號管加入2.3ml生理鹽水，2號不加，3號—9號各加入0.5ml生理鹽水。1號管加入0.2ml被檢血清，混勻后各吸0.5ml加入2、3號管。從3號開始做倍比稀釋，8號吸0.5ml棄去。
3.加入抗原：10倍稀釋抗原（用燒杯，1ml抗原9ml生理鹽水），從2號開始每支加0.5ml稀釋后抗原，從2號開始，血清被稀釋濃度為1：25、1:50、1:100、1:200、1:400、1:800、1:1600
4.凝集試驗標準比濁管的配制（判定透明程度的依據(jù)）：取5支試管，編號，取稀釋后的抗原再做2倍稀釋。
管號抗原稀釋液鹽水(ml) 清亮度標記
(ml)
1 0.00 1.00 100% ++++ 2 0.25 0.75 75% +++ 3 0.50 0.50 50% ++
4 0.75 0.25 25% +
5 1.00 0.00 0% —

充分混勻，將所有試管放入溫箱中37℃培養(yǎng)20—22小時取出，在室溫下放置1—2小時后觀察結(jié)果。
5.結(jié)果判定：1號管清亮透明，9號管均勻渾濁（對比）
假如試驗管包括6號之前都透明，取出6號管比較，若其與2號比較管相近，則被檢血清結(jié)果為1:400，+++
牛血清凝集價在1:100以上時，該血清樣品為布病陽性，血清凝集價在1:50時，該血清樣品為疑似反應(yīng)，經(jīng)3—4周后須再做一次檢查，扔為疑似反應(yīng)者判為陽性，凝集價在1:50以下則為陰性反應(yīng)。
羊和豬血清在1:25凝集為可疑，在1:50或以上凝集為陽性。
總結(jié)：RBPT在使用時操作方便、快捷，適用于大規(guī)模的篩選檢疫，但易出現(xiàn)假陽性。SAT特異性高，檢測比較準確，但操作麻煩，費時費力，不適用于大規(guī)模的篩選檢測，不能區(qū)分人工**和自然感染。先用RBPT篩選，陽性樣品再用SAT復核以做出比較準確的判斷。

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